27
Bəlğəm nümunələri, sayı 6-8-dən artıq olmayan dəstlərdə işlənməməlidir, çünki burada
təsvir edilmiş üsullar ciddi şəkildə zamandan asılı olan üsullardır. Daha böyük dəstlər bu zaman
içində işlənə bilməz (natrium-fosfat və CPC üsulları istisna olmaqla). Zamandan daha az asılı
olan bu üsulların (sonuncular) birinci mərhələsi mikroskopiya laboratoriyalarında, BTK
xaricində aparıla bilər. Biotəhlükəsizlik səviyyəsi 2 olan laboratoriyaya daşınma, natrium-fosfat
üsulu
üçün bir gün içərisində, CPC üsulu üçün isə bir həftə içərisində təşkil olunmalıdır.
NALC–NaOH istifadə etməklə dekontaminasiya:
Mukolitik amil N-asetil L-sistein (NALC) dekontaminasiyaedici amil – yəni natrium
hidroksidin daha az və son konsentrasiyada istifadə edilməsinə imkan verir. Nümunədə ola
biləcək və NALC-i inaktivləşdirən ağır metal ionlarını birləşdirmək üçün natrium sitrat verilir.
Bu metod, maye qidalı mühitdə inokulyasiya üçün yararlıdır.
Bərk qidalı mühitdə inokulyantın paylanması və yayılması üçün şüşələr ən az 1 həftə qapağı
boşaldılmış, üfüqi vəziyyətdə saxlanılmalıdır. İnkubasiyadan 1 həftə sonra, mühitin qurumasını
azaltmaq üçün qapaqlar kip bağlanır. Sonra şüşələr, termostatlarda sahənin azad edilməsi
məqsədilə, vertikal qoyula bilər.
Bərk qidalı mühitdən istifadə edərkən oxunma və şərh
Kontaminasiyanın təyini və əgər ehtiyac varsa digər nümunənin vaxtında tələb edilməsi
üçün,
birinci həftə iki dəfə olmaqla, kolonial formasiya hər həftə yoxlanılır.
Kontaminasiyaya uğramış kulturalar və sürətlə artan mikobakteriya (7 gündən tez görünən
koloniyalar) təmizlənir. Nəticələri dərhal bildirilir və başqa nümunə tələb edilir.
M. tuberculosis koloniyaları 3-4 həftə ərzində yaxşı inkişaf etməlidirlər. Təyinindən və
identifikasiyasından dərhal sonra hesabat verilir. Neqativ kimi hesabat verməzdən əvvəl,
kulturalar 8 həftəyə qədər saxlanılmalıdırlar.
Maye qidalı mühitdən istifadə edərkən oxunma və şərh Kolonial formasiyanı hər gün (və
ya avtomatlaşdırılmış sistemdən istifadə olunursa, istehsalçının təlimatına müvafiq olaraq)
yoxlanılır.
Pozitiv kimi təyin olunmuş istənilən şüşə, təmizliyinə görə TDM mikroskopiya vasitəsilə və
əksər bakteriyaların artması üçün əlverişli olan bərk qidalı mühitə (məs., qanlı aqar, şokolad,
ürək-beyin ekstraktı aqarına) inokulyasiya olunmaqla yoxlanılmalıdır.
Neqativ kimi hesabat verməzdən əvvəl, kulturalar 6 həftə saxlanılmalıdır. Flakonu
atmaqdansa, sonrakı mümkün artımın tədqiqi üçün şüşəni senrtrifuqadan keçirmək və maye
qidalı mühit flakonuna və çəp LY mühitininə inokulyasiya etmək daha məqsədəuyğun ola bilər.
Mikobakteriyanın identifikasiyası
Kolonial morfologiya və turşuya davamlılıqdan əlavə, mikobakteriyanın identifikasiyası
daha çox adi biokimyəvi sınaqlara, sürətli DNT yoxlamalarına və immunoxromatoqrafik
sınaqlara əsaslanır. Mikobakteriya ştamlarının nümunələrin səviyyəsində identifikasiyası
xüsusilə
vacibdir, çünki NTM halları vərəm kimi səhv diaqnoz edilə bilər.
Yüksək vərəm hadisələri olan ölkələrdə mikobakterioloji izolyatların böyük əksəriyyəti M.
tuberculosis olacaq, NTM-in yayılması isə daha çox İİV infeksiyası olan pasiyentlərə xasdır.
Nümunələrin M. tuberculosis kimi təsdiqlənməsinə qədər, fenotipik şəkildə birinci sıra
dərmanlara davamlı görünən mikobakterial izolyatlar NTM olan infeksiyanı və dərmana davamlı
olmayan vərəmi təmsil edə bilər. NTM müalicəsi dərmanlara davamlılıq göstərən vərəmin
28
müalicəsindən tamamilə fərqlidir. Minimum olaraq, dərmana davamlılıq göstərən vərəm
proqramlarını dəstəkləyən laboratoriyalar adi biokimyəvi identifikasiya sınaqları və ya
beynəlxalq qaydalara uyğun digər metodla aparmağa qadir olmalıdır.
İmmunoxromatoqrafik sınaqlar (zolaq əmələ gəlməsi sınağı kimi adlanan) M.tuberculosis
kompleksinin və NTM-lərin sürətli diskriminasiyasına imkan verir. Həm adi biokimyəvi
sınaqlar, həm də zolaqların əmələ gəlməsi sınaqları kulturanın həyata keçirildiyi milli yoxlama
laboratoriyaları üçün uyğundur.
Maye qidalı mühitlərdə dərmana həssaslıq testi-proporsiya metodu
MGİT sulu qidalı (Middlebrook 7H9) mühitində DHT-i bərk və ya maye mühitdən alınmış
pozitiv kulturalardan aparıla bilər.
Aşağıda tövsiyə edilmiş zaman çərçivəsinə riayət etmək dəqiq
nəticələr əldə etmək üçün
vacibdir.
1. Cihazın MGİT sınaq şüşəsinin pozitivliyini təyin etdiyi gün Gün 0 sayılır.
2. Sınaq şüşəsi ayrıca inkubatorda 37 ºS + 1 ºS-də inkubasiyadan əvvəl ən azı bir
gün əlavə
inkubasiya olunmalıdır (Gün 1) .
3. Pozitiv sınaq şüşəsi DHT üçün (Gün 5)-ə qədər istifadə oluna bilər.
4. Bərk qidalı mühitdəki artımdan pozitivliyin qeyd edildiyi 15 gün
içində istifadə
edilməlidir.
4–13 günlük keyfiyyət testi (maye və ya bərk qidalı mühitdən). Flüoressentliyin artması
“Artım Vahidləri” (AV) kimi dəyərləndirilir, həssaslıq və AV dəyərləri Unloaded AST Set
hesabatında çap edilir.
Test sona çatdıqdan sonra (4-21 gün arasında) cihaz hazır cavabları göstərir. Set Carrier
həssaslığı skan edir və hesabatı çap edir. Cihazın çıxarışı hər bir dərman üçün həssaslığı göstərir.
Nəticələr keyfiyyət göstəriciləridir: Həssas(H)-Susceptible (S), Davamlı (D)-Resistant (R) və ya
or təyin olunmayıb(X)-indeterminate (X). Cihaz nəticələri, artım kontrolundakı artım vahidi
(AV) 400-ə çatan zaman (4-13 gün ərzində) şərh edir. Bu nöqtədə, dərman flakonunun AV
dəyərləri hesablanır. •S = Susceptible – dərman şüşəsinin AV –si 100-dən azdır , R = Resistant –
dərman şüşəsinin AV –si 100 və ya daha yüksəkdir, X = Səhv-Error – təyin olunmayan nəticələr.
Testə təsir edə bilən müəyyən vəziyyətlərdə, məsələn, control AV 4 gündən az müddətdə >400-ə
çatanda yaranır. Belə hallarda, test fəal şəkidə çoxalan, M.tuberculosis kompleksi olduğu təyin
edilən, təmiz kultura ilə təkrarlanmalıdır. Müəyyən dərmana davamlı ştamlar qidalı mühitdə çox
ləng çoxalır və nəticələr standart inokulyant ilə 13 gün ərzində alınmaya bilər. Bu halda, nəticə
əldə etmək üçün, inokulyantı, kultura suspenziyasının durulaşdırılmasını azaltmaq yolu ilə
çoxaltmaq lazımdır.
Bərk qidalı mühitlərdə dərmana həssaslıq testi-proporsiya metodu
Hal-hazırda vərəm mikobakteriyalarına həssaslığı öyrənərkən proporsiya metodundan
istifadə etməklə Mycobacterium tuberculosis və M.tb kompleksinin digər nümayəndələrinin
(M.africanum və M.bovis ən tez-tez rast gələnləridir) Levenşteyn-Yensen qidalı mühitində
vərəm əleyhinə preparatlarla dərmana həssaslıq testini izah edir.
Burada yüksək konsentrasiyalarda canlı, infeksion bakteriyaların suspenziyaları (>10
9
basil/ml-dən başlayaraq) işlədildiyindən, təhlükəsizlik və müdafiə tədbirlərinin gözlənilməsi
mütləqdir. Prosedur ÜST-nin 3-cü Biotəhlükəsizlik səviyyəsi standartlarına cavab verən və
yalnız laboratoriya işçilərinin daxil ola biləcəyi məhdud girişlı laboratoriyada həyata keçirilməlir
M. tuberculosis ştamının proporsiya (nisbət) üsuluna müvafiq olaraq davamlılığı, normada
kliniki mikrobiologiyada tətbiq edilən davamlılıq anlayışından fərqlənir. Proporsiya üsulu