10.3Parametry hodnocení
Hodnocení parametrů bylo provedeno, jak před převedení okřehku do destiček (den 0), tak po 4 a 10 dnech kultivace. U každé experimentální varianty byl hodnocen:
-
počet rostlin;
-
-
erstvá hmotnost;
-
hmotnost sušiny;
-
obsah fotosyntetických pigmentů – chlorofyl a, chlorofyl b a karotenoidy;
-
poměr obsahu chlorofylu a/b; poměr součtu obsahu chlorofylu a a b/karotenoidů;
-
parametry fluorescence chlorofylu – základní fluorescence (F0), maximální kvantový výtěžek PSII (FV/FM), efektivní kvantový výtěžek (ΦII) a nefotochemické zhášení (NPQ);
-
velikost listové plochy.
10.3.1Stanovení počtu rostlin, čerstvé hmotnosti a hmotnosti sušiny
Při hodnocení příslušné experimentální varianty byl nejdříve zjištěn počet rostlin. Následně byly rostliny osušeny filtračním papírem a gravimetricky, s přesností na 4 desetinná místa, stanovena jejich čerstvá hmotnost. Po zvážení byly rostliny vloženy do papírových sáčků, sušeny v sušárně při teplotě 85°C po dobu 6 hodin a poté gravimetricky stanovena hmotnost sušiny.
10.3.2Stanovení obsahu fotosyntetických pigmentů
Obsah fotosyntetických pigmentů – chlorofylu a, chlorofylu b a karotenoidů, byl stanoven spektrofotometricky za pomocí přístroje UV-VIS Spektrofotometru Schimadzu (Japonsko). Z každého zatížení bylo naváženo 3 × 0,3 g čerstvé hmotnosti rostlin, které byly homogenizovány v třecí misce za pomoci malého přídavku mořského písku a 100% acetonu. Zhomogenizovaná směs byla přefiltrována přes fritu 3 a zředěna na objem 5 ml. Absorbance vzorků byla měřena při vlnových délkách 662 nm (chlorofyl a), 644 nm (chlorofyl b) a 470 nm (karotenoidy) [µg/ml].
Pro výpočet obsahu chlorofylu a, chlorofylu b a karotenoidů byly použity rovnice podle Lichtenthalera (1987):
Chlorofyl a = 11, 24 x A662 – 2,04 x A644
Chlorofyl b = 20,13 x A644 – 4,19 x A662
Karotenoidy = (1000 x A470 – 1,9 x chlorofyl a – 63,14 x chlorofyl b)/214
kde:
-
A představuje odečtenou hodnotu absorbance stanovenou spektrofotometricky při dané vlnové délce;
-
-
íselné hodnoty v rovnicích představují molární absorpční koeficienty dle Lichtenthalera.
Obsah fotosyntetických pigmentů byl vyjádřen na mg/g sušiny.
Parametry fluorescence chlorofylu byly měřeny pomocí fluorometru Handy FluorCam 6 (PSI) (Obr. 10.3) metodou saturačních pulzů. Před začátkem měření byly rostliny zatemněny po dobu 10 minut. Měřením a výpočtem byly získány hodnoty:
-
F0 – základní fluorescence, kterou je možné zaznamenat po ozáření předzatemněné rostliny slabým měřícím světlem; molekula chlorofylu PSII se excituje, ale k přenosu této energie na plastochinon QA a necyklickému transportu elektronů nedochází. Vlivem stresových podmínek se hodnota F0 zvyšuje.
-
FV/FM – základní fluorescenční poměr; podíl variabilní (FV), což je maximální hodnota fluorescence zmenšená o základní fluorescenci (F0) a maximální fluorescence (FM). Hodnota poměru FV/FM indikuje snížení funkce nebo poškození reakčních center PSII. U rostlin vystavených stresovým podmínkám dochází k negativnímu ovlivnění funkce PSII, což má za následek snížení hodnoty FV/FM.
-
ΦII – efektivní kvantový výtěžek fotochemických reakcí fotosyntézy ve PS II vyjadřuje rychlost aktuálně probíhajících procesů fotosyntézy. Často je využíván v experimentální praxi pro kvantifikaci míry stresu působícím ve PSII. Dále vyjadřuje, jaké je nejvyšší účinnost procesů účastnící se přenosu excitační energie do lineárního transportu elektronů. Podává nám informaci o celkové fotosyntéze.
-
NPQ – nefotochemické zhášení fluorescence chlorofylu; patří k důležitým fluorescenčním parametrům vztahujícím se ke světelně adaptovanému stavu. Charakterizuje procesy, které vedou ke snížení hodnoty FM v průběhu adaptace rostliny na světlo. NPQ kvantifikuje nefotochemické procesy způsobující přeměnu velké části excitační energie na teplo. Vlivem poškození rostliny nebo působením stresových podmínek na rostlinu se hodnota NPQ zvyšuje.
Obrázek 10.3
Fluorometr Handy FluorCam 6 (Fotografie Ustohalová)
10.3.4Stanovení velikosti listové plochy
Po kalibraci zorného pole fluorometru Handy FluorCam 6 na makrotitrační destičku byla stanovena velikost listové plochy okřehku. Podle kalibrace byla přepočítána velikost listové plochy každého lístku z pixelů na metrickou jednotku mm2.
10.3.5Statistické hodnocení dat
Získaná data byla statisticky vyhodnocena programem Statistica 10. Pro hodnocení dat byla použita vícefaktorová i jednofaktorová analýza rozptylu (ANOVA). Homogenita rozptylů dat byla ověřena Cochran, Hartley, Barlett testem. Normalita rozložení dat byla ověřena Shapiro – Wilkova testem. Porovnání významných rozdílů bylo provedeno pomocí Scheffého testu na hladině významnosti P = 0,05.
10.4Seznam obrázků
Obrázek 11.1
|
Počet rostlin okřehku před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.2
|
Počet rostlin okřehku před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.3
|
Čerstvá hmotnost po zatížení (den 0) a po 4 a 10 dnech při zvyšující se hodnotě pH 3,5 – 4,5 – 5,5 – 7,5 a bez přítomnosti kadmia
|
Obrázek 11.4
|
Hmotnost sušiny po zatížení (den 0) a po 4 a 10 dnech při zvyšující se hodnotě pH 3,5 – 4,5 – 5,5 – 7,5 a bez přítomnosti kadmia
|
Obrázek 11.5
|
Čerstvá hmotnost před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.6
|
Čerstvá hmotnost před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.7
|
Hmotnost sušiny před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.8
|
Hmotnost sušiny před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.9
|
Obsah chlorofylu a před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.10
|
Obsah chlorofylu a před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.11
|
Obsah chlorofylu b před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.12
|
Obsah chlorofylu b před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.13
|
Obsah karotenoidy před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.14
|
Obsah karotenoidy před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.15
|
Poměr obsahu chlorofylu a/b před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.16
|
Poměr obsahu chlorofylu a/b před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.17
|
Poměr obsahu chlorofylu a+b/karotenoidy před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.18
|
Poměr obsahu chlorofylu a+b/karotenoidy před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Obrázek 11.19
|
Velikost listové plochy před zatížením (den 0) a po 4 dnech kultivace
|
Obrázek 11.20
|
Velikost listové plochy před zatížením (den 0) a po 10 dnech kultivace
|
Dostları ilə paylaş: |
